1、將切成塊的土豆放入燒杯中煮半個小時，隨即濾水備用，再將瓊脂放入水中，然後把水燒開，待瓊脂溶化後再煮一段時間，之後把汁液分放至試管中。
2、將試管放在高壓鍋中消毒，隨即斜放試管，直至冷涼凝固。
3、對平菇消毒殺菌，然後切成小塊，接種至基質上。
4、用塞子堵住試管口，再將基質放入培養箱中培養菌絲。
一、平菇菌種如何製作
1、一級菌種
（1）將土豆切成小塊並放入燒杯中煮30多分鐘，隨即過濾出液體留作備用。
（2）將瓊脂放入過濾出來的液體中，然後將其燒開，待瓊脂完全溶化後再煮一段時間，之後把汁液分放到試管中，再放到高壓鍋內消毒殺菌。經過消毒後，將試管斜放，直到冷涼凝固後準備接種。
（3）用酒精清洗品相優良的嫩蘑菇，經過消毒後在無菌箱中將蘑菇切成小塊，隨即將其接種到瓊脂基質上。接種時下面要放一個酒精燈，試管口要在酒精燈上方，儘量保證接種空間無菌。
（4）用塞子堵上試管口，再將瓊脂基質放入培養箱中開始培養，待長滿菌絲後即形成一級菌種。
2、二級菌種
（1）將大豆等穀粒煮熟，再放置於無菌的條件下晾乾。
（2）玻璃瓶經高溫殺菌後放入晾好的穀粒，並封口，然後將玻璃瓶放到高壓鍋內用高壓進行滅菌，取出後放在無菌室冷涼。
（3）將培養瓶放到無菌箱裡，再將一級菌種放進去，然後用專用的小匙挖出黃豆大小的菌種接種入玻璃瓶內，注意接種時下面要放一個酒精燈，試管口要在酒精燈上方，儘量保證接種空間無菌。
（4）接種後隨即封口，最後將玻璃瓶放到培養室中培養菌種，待長滿菌絲後即可備用。
3、三級菌種（生產用菌種）
（1）製備方法與二級菌種的製備方法基本相同，只是培養基通常要使用煮熟的玉米粒、麥粒、棉籽等物質。
（2）待三級菌種的菌絲長滿後即可取出來種蘑菇。經歷了三級菌種的培育後，平菇菌便已完全製作完成。
二、平菇菌種如何培育
1、準備材料
準備數個六成熟的鮮平菇，以及適量的土豆、瓊脂粉、葡萄糖粉。
2、母種培養基配方
土豆200克（取汁），葡萄糖粉20克，瓊脂20克左右，硫酸鎂1.5克，磷酸二氫鉀3克，蛋白腖3克，水1000毫升。
3、母種培養基製作過程
（1）將土豆去皮切片，放入1000毫升開水（水一定要夠1000毫升，不夠時需要補充）中煮半小時左右，煮熟後用紗布過濾取汁。
（2）將土豆汁倒入盛有其他配料的容器中，一邊倒一邊攪拌，直至拌勻。
4、裝入試管
（1）把混合液吸入試管中，大約吸入試管長度的三分之一左右即可。
（2）用棉花把試管口塞緊，再把裝好的試管用牛皮紙包裹，牛皮紙外用繩子捆綁，下部不要蓋住便於以後操作觀察。
（3）將綁好的試管放入高壓鍋中用高壓消毒。
5、消毒
（1）消毒時間一般需要持續30分鐘左右，期間高壓鍋的溫度要控制在120℃左右。
（2）取出試管後趁熱傾斜放置，以便試管中的液體凝固後有一個斜面，這樣利於菌絲的生長。
6、接種
（1）用小刀將新鮮的平菇切去中間一小塊，然後放入試管中培養，注意整個過程都要在無菌的環境下操作，而且整個器械都要用75%的酒精進行消毒。
（2）將試管放入保溫箱，溫度保持在25℃，經過10天左右便可培育出平菇菌母種。
