1、進行接種操作的相對潔淨區域或房間叫無菌室或叫接種室。無菌室達到—定的無菌程度，面積—般4—6平方米，高度2—2.2米。室內地面、牆壁平整光滑，水泥牆面塗刷油漆或防水、防黴塗料，也可裝貼塑面板和殺菌瓷面磚。無菌室的門要和工作臺保持—定距離，通常採用左右移動拉門，有條件裝用超淨工作臺，效果更好。
以化學滅菌消毒的無菌室稱為化學滅菌無菌室。食用菌栽培大多數採用這類無菌室。用過濾空氣淨化環境的無菌室用於機械、物理滅菌無菌室，也稱潔淨室。潔淨氣流分層流式和亂流式兩種，亂流式潔淨級別低，用於工業生產。食用菌接種室常在舊建築上改造，需增添有技術走廊的亂流潔淨室。一般工作區要求空氣潔淨度達到100級，溫度23-25℃，相對溼度50-65％，水平層流速度0.3-0.5米／秒。
2、無菌室使用注意事項
（1）使用前①用紫外線滅菌15-30分鐘，或用5％石碳酸、3％煤酚皁液噴霧後，再開紫外線燈滅菌；②用富爾馬林—甲醛燻蒸；③用臭氧發生器殺菌30分鐘後。三種方法交替使用，效果更好。一般使用10-30天后，再滅菌一次。應特別重視進入無菌室前的人身淨化和熟悉操作要求。
（2）滅菌效果檢驗方法是在室內一定高度放置若干葡萄糖瓊脂培養叢玻璃皿，順次開啟皿蓋5分鐘，然後蓋上皿蓋，連同對照的玻璃皿一起放置到溫度為30℃的培養箱中培養3天，觀察菌落數。每個玻璃皿內雜菌落數超過3個為不合格。若有不合格的，應檢查重來，直到合格為止。
3、紫外線滅菌燈
用於滅菌的紫外線燈光裝置叫紫外線滅菌燈。紫外線分長波紫外線和短波紫外線，長波紫外線用於保健治療，短波紫外線用於滅菌。
（1）滅菌原理。紫外線滅菌是當微生物菌體被紫外線照射並吸收了紫外線後，引起細胞內的氨基酸、原漿蛋白、酯的化學變化，使細胞變性，從而導致細菌死亡。
（2）使用注意事項。紫外線屬低能量的電磁輻射，穿透力很差，影響紫外線滅菌的因素有：
①空氣中的塵粒與溼度。當空氣中含800-900個／立方米塵粒時，滅菌效果降低20-30％；當相對溼度由33％增至56％時，滅菌效果減為原來的1／3。
②環境溫度。大多數燈管設計在25-40℃條件工作，如果外界溫度由27℃減低到4℃時，輸出能量要減低65-80％。
③紫外線對固體的穿透力。凡可見光不能穿透的物質，紫外線亦不能穿透，對聚氯乙烯薄膜開始可以透過30％以上，但是經6小時照射後，由於薄膜變性透過率
