1）木條的選擇
要求使用較硬實，耐蒸煮，不軟化，易接種的材料。如樹木枝條、竹片、一次性筷子、雪糕棒等。木條的木材最好為闊葉硬木，不能用含芳香物質的松柏木。木條長度一般要比栽培菌袋短2～3釐米。
2）木條的浸泡
常溫（20℃左右）條件下，用2%的石灰水浸泡竹片/木條2天，將其泡透。撈出後用清水沖洗乾淨，陰乾待用。
3）輔料的準備
將白麵粉和玉米面拌勻後製成輔料，白麵粉與玉米麵的比例為4︰1。備好的竹片/木條在配製好的輔料中滾動，均勻沾上一層輔料後裝瓶（袋）。
4）裝瓶（袋）：
製作二級種最好用竹片。將竹片整捆裝進菌種瓶或菌種袋中（750毫升的菌種瓶，每瓶可裝竹片約160根左右；15×27cm的菌袋，每袋可裝240～250根）。裝好後頂部鋪薄薄一層棉籽殼（事先用2%石灰水洗淨），菌種瓶塞上棉塞後蓋一層塑料膜，菌袋袋口套上套環，扣蓋兒前在環上蓋一層塑料膜，然後再蓋上蓋子準備滅菌，防止水蒸氣進入瓶內或袋內；製作三級菌種的方法與二級菌種基本相同，一般選用15×27cm的菌袋，將竹片換作木條或雪糕棒，木條頂部可不用鋪放棉籽殼。
5）滅菌
常壓滅菌，100℃保持10小時左右，再悶鍋10小時以上，保證徹底滅菌。
6）接種
出鍋完全冷卻後在接種箱內進行無菌接種。先開啟蓋口，揭掉塑料膜，用滅過菌的膠棒在待接菌種袋內打個孔，接入事先準備好菌種後馬上扣蓋，然後上架培養。一般試管母種可轉接二級種3～4瓶/袋，二級種的接種數量視裝竹片數多少（一根竹片可接1瓶/袋三級種）。
7）培養
接種後在22～24℃環境下培養25天左右，再後熟2～3天使菌絲充分吃入木條中後方可使用。這樣的菌種接種成活率高，發菌速度快。培養過程注意保持環境的空氣流通，否則容易增加汙染率。
